第六章 色谱法
色谱法是一种物理或物理化学分离分析方法。先将混合物中各组分分离而后逐个分析，是分析化合物有力手段。具有高灵敏度、高选择性、高效能、分析速度快、应用范围广等优点。

第一节 概论
一、基本原理
色谱过程是物质分子在相对运动的两相(固定相和流动相)间分配平衡的过程，可用分配系数K和容量因子k描述。
1.分配系数K=Cs/Cm，与组分、固定相和流动相性质和温度有关。
2.容量因子k＝Ws/Wm，不仅与组分、固定相和流动相性质和温度有关，还与两相体积有关。容量因子不等是色谱分离的先决条件。
3.色谱过程方程：保留时间与分配系数关系tR=t0(1+k)
二、分类
1．按分离原理环球网校搜集整理www.edu24ol.com
(1) 吸附色谱法：固定相为固体
(2) 分配色谱法：固定相为液体
(3) 离子交换色谱法：固定相为离子交换树脂
(4) 分子排阻色谱法：固定相为多孔填料
2．按操作形式：平面色谱、柱色谱、电泳法
3．按两相物态：气相色谱、液相色谱

第二节 薄层色谱法
一、基本原理
吸附剂对不同组分A和B具有不同吸附能力，展开剂也对A和B有不同溶解、解吸能力，当展开剂不断展开，A、B在吸附剂和展开剂之间连续不断吸附解吸，产生差速迁移得到分离。
二、固定相
1．硅胶：含水量越高，活性越低，吸附力越弱。在105～110℃加热30min，使其活化。硅胶G、硅胶H、硅胶GF254、硅胶HF254的含义环球网校搜集整理www.edu24ol.com
2．氧化铝：碱性、中性和酸性三种。活性与含水量有关
3．聚酰胺：可与酚羟基、羧基、氨基酸形成氢键，选择性高
三、操作方法
1．制备：1份固定相与3份水混和涂布，110℃烘30分钟
2．点样与展开：点样一般为直径2～4mm圆点，距底2.0cm；展开距离一般为10～15cm。
3．检视：荧光板在紫外光下检视；普通薄层板用物理方法或显色剂显色。
4．系统适用性试验
比移值：Rf＝l/l0，为组分迁移距离与展开剂迁移距离之比
比移值的最佳范围是0.3～0.5，可用范围是0.2～0.8。
影响比移值因素：①被分离物质的结构和性质。极性较强的组分Rf较小。②薄层板性质。吸附剂活性越强，Rf较小。③展开剂性质。极性越强展开剂Rf值增大④展开剂蒸气饱和程度。
3.分离度：R=2d/(W1+W2)，两相邻斑点中心距离与两斑点平均宽度的比值
四、应用
1.鉴别：比较供试品与对照品溶液的比移值
2.杂质检查：杂质对照品比较法；自身稀释对照法

第三节 高效液相色谱法
一、基本原理
1．基本概念
色谱峰参数：峰高或峰面积(用于定量)，峰位(保留值表示，用于定性)，峰宽(用于衡量柱效)
保留值：保留时间、死时间、调整保留时间环球网校搜集整理www.edu24ol.com